دوره ۱۱، شماره ۱ - ( زمستان ۱۴۰۰ )
جلد ۱۱ شماره ۱ صفحات ۸۸-۷۳ |
برگشت به فهرست نسخه ها
Download citation:
BibTeX | RIS | EndNote | Medlars | ProCite | Reference Manager | RefWorks
Send citation to:
BibTeX | RIS | EndNote | Medlars | ProCite | Reference Manager | RefWorks
Send citation to:
Bagheri H, Azadegan Qomi H, Amini K. Isolation and Cloning of Streptococcus Pneumoniae Surface Protein (PSP) gene in Escherichia Coli DH5 Alpha to Obtain Vaccine. aumj 2021; 11 (1) :73-88
URL: http://aums.abzums.ac.ir/article-1-1453-fa.html
URL: http://aums.abzums.ac.ir/article-1-1453-fa.html
باقری هاجر، آزادگان قمی حمید، امینی کیومرث. جداسازی و کلونینگ ژن پروتئین سطحی (psp) استرپتوکوک پنومونیه در باکتری اشریشیاکلی DH۵ آلفا جهت دستیابی به واکسن. نشریه علمی پژوهشی دانشگاه علوم پزشکی البرز. ۱۴۰۰; ۱۱ (۱) :۷۳-۸۸
هاجر باقری۱ 
، حمید آزادگان قمی۲ ، کیومرث امینی*۳
، حمید آزادگان قمی۲ ، کیومرث امینی*۳
۱- کارشناس ارشد میکروبیولوژی، گروه بیولوژی، دانشکده علوم پایه، دانشگاه آزاد اسلامی، واحد اراک، اراک، ایران
۲- استادیار، گروه میکروبیولوژی، دانشکده علوم پایه، دانشگاه آزاد اسلامی ،واحد اراک، اراک، ایران
۳- دانشیار، گروه میکروبیولوژی، دانشکده علوم پایه، واحد ساوه، دانشگاه آزاد اسلامی، ساوه، ایران ،Dr_kumarss_amini@yahoo.com
۲- استادیار، گروه میکروبیولوژی، دانشکده علوم پایه، دانشگاه آزاد اسلامی ،واحد اراک، اراک، ایران
۳- دانشیار، گروه میکروبیولوژی، دانشکده علوم پایه، واحد ساوه، دانشگاه آزاد اسلامی، ساوه، ایران ،
چکیده: (۱۸۵۱ مشاهده)
زمینه و هدف: استرپتوکوک پنومونیه یا پنوموکوک، دیپلوکوک گرم مثبت به قطر ۵/۰ تا ۲/۱ میکرومتر، آلفا همولیتیک و تحمل‌کننده اکسیژن از جنس استرپتوکوکوس و عامل بیماریهایی چون مننژیت و ذات الریه می‌باشد.باکتری حامل ژن پروتئین سطحی Pneumococcal A (PspC)از S بوده و هدفی امیدوارکننده برای فرمولاسیون های واکسن جدید است. به همین جهت هدف از انجام این تحقیق جداسازی و کلونینگ ژن پروتئین سطحی (psp) استرپتوکوک پنومونیه در باکتری اشرشیاکلی DH5 آلفا به منظور تهیه واکسن برای کودکان می‌باشد.
مواد و روش‌ها: نمونه‌ها از تعداد 100 کودک سالم، در مهـد کودک هـای شـهر اراک به طور تصادفی از نازوفارنژیال کودکان سالم زیـر 6 سـال بود که در مجموع 12 ایزوله پنوموکوک جداسـازی شد. به منظور جداسازی و شناسایی اولیه استرپتوکوک پنومونیه از محیط کشت و آزمون های بیوشیمیایی استفاده شد و استخراج DNA صورت گرفت. از طریق آزمون PCR سویه های واجد ژن pspC شناسایی شد. ژن pspC سویه های مثبت از طریق وکتور به باکتری میزبان اشرشیاکلی الحاق و از طریق تکنیک TA کلونینگ کلون شدند و در پایان از طریق تکنیک Real time PCR میزان بیان ژن‌ها در اشرشیا کلی DH5 آلفا سنجیده و برای رسم درخت فیلوژنی از نرم‌افزار clustalX و Mega5 استفاده شد.
یافته ها: از غربالگری نمونه های بالینی ارسالی به آزمایشگاه که براساس خصوصیات مورفولوژیک، میکروسکوپی و تست های بیوشیمیایی تعیین هویت شدند در مجموع 12 ایزوله پنوموکوک جداسازی شد. و از این تعداد 1 ایزوله دارای ژن pspC بود. پس از کلونینگ، ژن های pspC، سویه های کلون شده کلنی سلکشن (آبی/سفید) جداسازی شدند. به منظور تایید نتایج کلونینگ DNA , از کلنی های مشکوک استخراج و توسط آزمون Real time PCR گردید. در نهایت تصاویر سکانسینگ، m13 و منحنی تکثیر، بیان ژن در باکتری اشریشیاکلی DH5α را تایید کرد.
نتیجه گیری: در این مطالعه با ارزیابی ژنومی پنوموکوک جدا شده از کودکان زیر 6 سال، ژن pspC با پتانسیل ایمن سازی و به منظور ساخت واکسن از این باکتری استخراج گردید و کلونینگ با موفقیت صورت گرفت. در نهایت با بررسی درخت فیلوژنی رسم شده در این مطالعه میزان تشابه و خویشاوندی گونه استرپتوکوک پنومونیه با سایر گونه‌ها نشان داده شد.
مواد و روش‌ها: نمونه‌ها از تعداد 100 کودک سالم، در مهـد کودک هـای شـهر اراک به طور تصادفی از نازوفارنژیال کودکان سالم زیـر 6 سـال بود که در مجموع 12 ایزوله پنوموکوک جداسـازی شد. به منظور جداسازی و شناسایی اولیه استرپتوکوک پنومونیه از محیط کشت و آزمون های بیوشیمیایی استفاده شد و استخراج DNA صورت گرفت. از طریق آزمون PCR سویه های واجد ژن pspC شناسایی شد. ژن pspC سویه های مثبت از طریق وکتور به باکتری میزبان اشرشیاکلی الحاق و از طریق تکنیک TA کلونینگ کلون شدند و در پایان از طریق تکنیک Real time PCR میزان بیان ژن‌ها در اشرشیا کلی DH5 آلفا سنجیده و برای رسم درخت فیلوژنی از نرم‌افزار clustalX و Mega5 استفاده شد.
یافته ها: از غربالگری نمونه های بالینی ارسالی به آزمایشگاه که براساس خصوصیات مورفولوژیک، میکروسکوپی و تست های بیوشیمیایی تعیین هویت شدند در مجموع 12 ایزوله پنوموکوک جداسازی شد. و از این تعداد 1 ایزوله دارای ژن pspC بود. پس از کلونینگ، ژن های pspC، سویه های کلون شده کلنی سلکشن (آبی/سفید) جداسازی شدند. به منظور تایید نتایج کلونینگ DNA , از کلنی های مشکوک استخراج و توسط آزمون Real time PCR گردید. در نهایت تصاویر سکانسینگ، m13 و منحنی تکثیر، بیان ژن در باکتری اشریشیاکلی DH5α را تایید کرد.
نتیجه گیری: در این مطالعه با ارزیابی ژنومی پنوموکوک جدا شده از کودکان زیر 6 سال، ژن pspC با پتانسیل ایمن سازی و به منظور ساخت واکسن از این باکتری استخراج گردید و کلونینگ با موفقیت صورت گرفت. در نهایت با بررسی درخت فیلوژنی رسم شده در این مطالعه میزان تشابه و خویشاوندی گونه استرپتوکوک پنومونیه با سایر گونه‌ها نشان داده شد.
ارسال پیام به نویسنده مسئول
| بازنشر اطلاعات | |
 |
این مقاله تحت شرایط Creative Commons Attribution-NonCommercial 4.0 International License قابل بازنشر است. |
