|
بررسی پایداری بیان پروتئین غشای سطحی Lipl41به صورت فیوژن با پروتئین کوچک چاپرون Lepدر لپتوسپیرا
|
نرگس گلاب    ، ناصر هرزندی ، پژواک خاکی ، مجید تبیانیان ، مجید اسمعیلی زاد |
| گروه میکروبیولوژی، واحد کرج، دانشگاه آزاد اسلامی، کرج، ایران ، nasharzan@gmail.com |
|
|
چکیده: (1076 مشاهده) |
زمینه و هدف: لپتوسپیروزیس یک بیماری باکتریایی مشترک بین انسان و دام با انتشار جهانی می‌باشد که توسط اسپیروکت بیماریزایی به نام لپتوسپیرا ایجاد می‌گردد. متاسفانه تشخیص این بیماری بدلیل علائم متعدد بالینی بسیار مشکل و دارای محدودیت است. LipL41یکی از فراوانترین پروتئینهای غشای خارجی لپتوسپیرا ست که فقط در سویه های بیماریزا وجود دارد. ژن کوچکی بنام lepدر فاصله بسیار نزدیک با ژن lipl41بر روی کروموزوم باکتری قرار دارد که کمک کننده بیان آن می‌باشد. در این مطالعه برای اولین بار بررسی بیان و تخلیص پروتئین فیوژن Lipl41-Lep بر روی سویه های بومی رایج لپتوسپیرای بیماریزا در سیستم پروکاریوتی صورت گرفت.
مواد و روش ها: توالی ژنی بر مبنای الگوی سرووارهای ایران پس از جمع آوری کلیه اطلاعات موجود در سایتNCBI طراحی و ساخته شد. سپس با کلونینگ در وکتوربیانی pET32a+ درE.coliBL21(DE3) انتقال و توسط القاء کننده IPTG بیان انجام شد. پس از لیز سلولی با روش دناتوراسیون خالص سازی صورت گرفت. روش وسترن بلات برای تایید حضور پروتئین فیوژن نوترکیب استفاده گردید.
یافته‌ها :نتایج آنالیز PCR وجود باند واضح حدود2000جفت باز را روی ژل آگارز تأیید کرد. مقادیر زیادی از پروتئین فیوژن نوترکیب60 کیلودالتونی در دمای ˚C37، با غلظت mM1/0 از IPTG و زمان 4 ساعت پس از القا به صورت نامحلول تولید، استخراج و خالص سازی شد.
نتیجه گیری:یافته‌ها نشانگر مقدار کافی از بیان و تخلیص این پروتئین نوترکیب بصورت فیوژن بود. بنابراین از آن می‌توان در آینده بعنوان کاندیدای مناسبی در جهت تستهای تشخیص سرولوژیک مانند الایزا و همچنین برای واکسن های نوترکیب بر علیه لپتوسپیروز استفاده شود. |
|
| واژه‌های کلیدی: لپتوسپیرای بیماریزا، پروتئین فیوژن نوترکیب Lipl41-lep، بیان، تخلیص |
|
|
متن کامل [PDF 1102 kb]
(438 دریافت)
|
نوع مطالعه: پژوهشي |
موضوع مقاله:
تخصصي
دریافت: 1400/7/24 | پذیرش: 1400/7/10 | انتشار: 1400/7/10
|
|
|
|
|
|
|
| ارسال پیام به نویسنده مسئول |
|
|
|
| ارسال نظر درباره این مقاله |
|
|
|
