fa تأثیر لیزات پروبیوتیک لاکتوکوکوس لاکتیس (+NIS ) بر بیان ژن‌های افلاکس پمپ پروتئوس میرابیلیس و نیز تاثیر ضد آپوپتوزی در رده سلولی سرطان کلیه عمومى General پژوهشي Research <p><span style="font-size:11pt"><span style="font-family:Calibri,sans-serif"><strong><span style="font-size:12.0pt"><span style="color:black">مقدمه</span></span></strong><span style="font-size:12.0pt"><span style="color:black">: </span></span><span style="font-size:12.0pt"><span style="color:black">باکتری‌ </span></span><em><span style="font-size:12.0pt"><span style="color:black">لاکتوکوکوس</span></span></em> <em><span style="font-size:12.0pt"><span style="color:black">لاکتیس</span></span></em><span style="font-size:12.0pt"><span style="color:black"> به‌عنوان یک پروبیوتیک مفید در درمان و پیشگیری از سرطان مورد استفاده هستند و با تولید باکتریوسین‌ها می&shy;توانند رشد سایر باکتری‌ها را مهار کنند</span></span><span style="font-size:12.0pt"><span style="color:black">. هدف از مطالعه حاضر بررسی اثرات لیزات پروبیوتیک </span></span><em><span style="font-size:12.0pt"><span style="color:black">لاکتوکوکوس</span></span></em> <em><span style="font-size:12.0pt"><span style="color:black">لاکتیس</span></span></em><span style="font-size:12.0pt"><span style="color:black"> (+ </span></span><em><span dir="LTR" lang="EN-US" style="font-size:12.0pt"><span style="color:black">NIS</span></span></em><span style="font-size:12.0pt"><span style="color:black">) بر بیان ژن‌های افلاکس پمپ باکتری </span></span><em><span style="font-size:12.0pt"><span style="color:black">پروتئوس</span></span></em> <em><span style="font-size:12.0pt"><span style="color:black">میرابیلیس</span></span></em><span style="font-size:12.0pt"><span style="color:black"> و برخی ژن‌های ضد آپوپتوز در رده سلولی سرطان کلیه است.</span></span></span></span><br> <span style="font-size:11pt"><span style="font-family:Calibri,sans-serif"><strong><span style="font-size:12.0pt"><span style="color:black">روش کار</span></span></strong><span style="font-size:12.0pt"><span style="color:black">: پس از بررسی و جداسازی 60 سویه </span></span><em><span style="font-size:12.0pt"><span style="color:black">پروتئوس</span></span></em> <em><span style="font-size:12.0pt"><span style="color:black">میرابیلیس</span></span></em><span style="font-size:12.0pt"><span style="color:black"> توسط تستهای تشخیصی و بیوشیمیایی، واکنش </span></span><span dir="LTR" lang="EN-US" style="font-size:12.0pt"><span style="color:black">Multiplex</span></span><em> </em><span dir="LTR" lang="EN-US" style="font-size:12.0pt"><span style="color:black">PCR</span></span> <span style="font-size:12.0pt"><span style="color:black">به منظور شناسایی ژنهای پمپ افلاکس </span></span><em><span style="font-size:12.0pt"><span style="color:black">پروتئوس</span></span></em> <em><span style="font-size:12.0pt"><span style="color:black">میرابیلیس</span></span></em><span style="font-size:12.0pt"><span style="color:black"> انجام شد. باکتری کشت شده و مایع رویی میکروارگانیسم تولید کننده نایسین سویه </span></span><em><span style="font-size:12.0pt"><span style="color:black">لاکتوکوکوس</span></span></em> <em><span style="font-size:12.0pt"><span style="color:black">لاکتیس</span></span></em><em><span dir="LTR" lang="EN-US" style="font-size:12.0pt"><span style="color:black">(PTCC 1336)</span></span></em><span style="font-size:12.0pt"><span style="color:black">جدا شد و فعالیت آن توسط چاهک گذاری در آگار بررسی گردید. توسط واکنش </span></span><em><span dir="LTR" lang="EN-US" style="font-size:12.0pt"><span style="color:black">Real-Time PCR</span></span></em><span style="font-size:12.0pt"><span style="color:black">، بیان ژن </span></span><em><span dir="LTR" lang="EN-US" style="font-size:12.0pt"><span style="color:black">AcrB</span></span></em><span style="font-size:12.0pt"><span style="color:black"> در سویه&shy; های </span></span><em><span style="font-size:12.0pt"><span style="color:black">پروتئوس</span></span></em> <em><span style="font-size:12.0pt"><span style="color:black">میرابیلیس</span></span></em><span style="font-size:12.0pt"><span style="color:black"> تیمار شده با سوپرناتانت مورد بررسی قرار گرفت.</span></span></span></span><br> <span style="font-size:11pt"><span style="font-family:Calibri,sans-serif"><strong><span style="font-size:12.0pt"><span style="color:black">یافته‌ها</span></span></strong><span style="font-size:12.0pt"><span style="color:black">: نتیجه سمیت سلولی این سوپرناتانت برای بیان نسبی ژن&shy;های </span></span><em><span dir="LTR" lang="EN-US" style="font-size:12.0pt"><span style="color:black">bcl-2</span></span></em><span style="font-size:12.0pt"><span style="color:black"> و </span></span><em><span dir="LTR" lang="EN-US" style="font-size:12.0pt"><span style="color:black">bax</span></span></em> <span style="font-size:12.0pt"><span style="color:black">در سلول‌های سرطانی کلیه از میان نمونه‌های </span></span><em><span style="font-size:12.0pt"><span style="color:black">پروتئوس</span></span></em> <em><span style="font-size:12.0pt"><span style="color:black">میرابیلیس</span></span></em><span style="font-size:12.0pt"><span style="color:black">، 37 نمونه واجد ژن </span></span><em><span dir="LTR" lang="EN-US" style="font-size:12.0pt"><span style="color:black">AcrA </span></span></em><span style="font-size:12.0pt"><span style="color:black">، 59 نمونه واجد ژن </span></span><em><span dir="LTR" lang="EN-US" style="font-size:12.0pt"><span style="color:black">AcrB</span></span></em> <span style="font-size:12.0pt"><span style="color:black">و 58 نمونه دارای ژن </span></span><em><span dir="LTR" lang="EN-US" style="font-size:12.0pt"><span style="color:black">Urea</span></span></em><span style="font-size:12.0pt"><span style="color:black"> بودند. نتایج تست </span></span><em><span dir="LTR" lang="EN-US" style="font-size:12.0pt"><span style="color:black">MIC</span></span></em><span style="font-size:12.0pt"><span style="color:black"> گویای مهار رشد سویه‌های پروتئوس <a name="_Hlk168181520">در غلظت</a></span></span><em><span dir="LTR" lang="EN-US" style="font-size:12.0pt"><span style="color:black">&mu;g/ml</span></span></em><em> </em><span style="font-size:12.0pt"><span style="color:black">&nbsp;375 سوپرناتانت بود. بیان ژن </span></span><em><span dir="LTR" lang="EN-US" style="font-size:12.0pt"><span style="color:black">AcrB</span></span></em><span style="font-size:12.0pt"><span style="color:black"> در سویه‌های تیمار شده نسبت به گروه کنترل به طور معنی‌داری کاهش یافت. باتوجه‌به آنالیز داده&shy;های تست </span></span><em><span dir="LTR" lang="EN-US" style="font-size:12.0pt"><span style="color:black">MTT</span></span></em><span style="font-size:12.0pt"><span style="color:black">، مقدار غلظت مهارکننده نیمی حداکثر (</span></span><em><span dir="LTR" lang="EN-US" style="font-size:12.0pt"><span style="color:black">IC50</span></span></em><span style="font-size:12.0pt"><span style="color:black">) برای این سوپرناتانت پس از گذشت 72 ساعت </span></span><span dir="LTR" lang="EN-US" style="font-size:12.0pt"><span style="color:black">&mu;g/ml</span></span><span style="font-size:12.0pt"><span style="color:black"> 8/202&nbsp; محاسبه شد.</span></span></span></span><br> <span style="font-size:11pt"><span style="font-family:Calibri,sans-serif"><strong><span style="font-size:12.0pt"><span style="color:black">نتیجه‌گیری</span></span></strong><span style="font-size:12.0pt"><span style="color:black">: نتایج نشان‌دهنده کاهش 86/52 درصدی بیان ژن </span></span><em><span dir="LTR" lang="EN-US" style="font-size:12.0pt"><span style="color:black">bcl-2</span></span></em> <span style="font-size:12.0pt"><span style="color:black">و افزایش 21/60 درصدی بیان ژن </span></span><em><span dir="LTR" lang="EN-US" style="font-size:12.0pt"><span style="color:black">bax</span></span></em><span style="font-size:12.0pt"><span style="color:black"> در سلول‌های سرطانی تیمار شده نسبت به گروه کنترل است.</span></span> <span style="font-size:12.0pt"><span style="color:black">بررسی&shy;های سمیت سلولی این تحقیق نشان دادکه با </span></span><em><span dir="LTR" lang="EN-US" style="font-size:12.0pt"><span style="color:black">IC50</span></span></em><span style="font-size:12.0pt"><span style="color:black"> معادل 8/202 میکروگرم/میلی لیتر قادر به سرکوب تکثیر سلول‌های سرطانی کلیه</span></span><em>&nbsp;</em><em><span dir="LTR" lang="EN-US" style="font-size:12.0pt"><span style="color:black">(ACHN)</span></span></em><span style="font-size:12.0pt"><span style="color:black">بود. </span></span></span></span></p> <p><span style="font-size:11pt"><strong><span style="font-size:12.0pt">Introduction</span></strong><span style="font-size:12.0pt">: </span><em><span style="font-size:12.0pt">Lactococcus</span></em> <em><span style="font-size:12.0pt">lactis</span></em> <span style="font-size:12.0pt">bacteria are used as a useful probiotic in treating and preventing cancer and can inhibit the growth of other bacteria by producing bacteriocins. The present study aimed to investigate the effects of probiotic lysate of </span><em><span style="font-size:12.0pt">Lactococcus</span></em> <em><span style="font-size:12.0pt">lactis</span></em><span style="font-size:12.0pt"> (+ NIS) on the expression of efflux pump genes of </span><em><span style="font-size:12.0pt">Proteus</span></em> <em><span style="font-size:12.0pt">mirabilis</span></em><span style="font-size:12.0pt"> and some anti-apoptotic genes in kidney cancer cell lines.</span></span><br> <span style="font-size:11pt"><strong><span style="font-size:12.0pt">Methods</span></strong><span style="font-size:12.0pt">: </span><span style="font-size:12.0pt">After examining and isolating 60 strains of </span><em><span style="font-size:12.0pt">Proteus</span></em> <em><span style="font-size:12.0pt">mirabilis</span></em><span style="font-size:12.0pt"> by diagnostic and biochemical tests, a Multiplex PCR reaction was performed to identify the efflux pump genes of </span><em><span style="font-size:12.0pt">Proteus</span></em> <em><span style="font-size:12.0pt">mirabilis</span></em><span style="font-size:12.0pt">. The bacteria were cultured and the supernatant of the nisin-producing microorganism </span><em><span style="font-size:12.0pt">Lactococcus</span></em> <em><span style="font-size:12.0pt">lactis</span></em><span style="font-size:12.0pt"> strain (PTCC 1336) was isolated and its activity was examined by plating on agar. By Real-Time PCR reaction, the expression of the </span><em><span style="font-size:12.0pt">acrB</span></em><span style="font-size:12.0pt"> gene in the </span><em><span style="font-size:12.0pt">Proteus</span></em> <em><span style="font-size:12.0pt">mirabilis</span></em><span style="font-size:12.0pt"> strains treated with supernatant was examined.</span></span><br> <span style="font-size:11pt"><strong><span style="font-size:12.0pt">Results</span></strong><span style="font-size:12.0pt">: </span><span style="font-size:12.0pt">The cytotoxicity result of this supernatant for the relative expression of </span><em><span style="font-size:12.0pt">bcl</span></em><span style="font-size:12.0pt">-</span><em><span style="font-size:12.0pt">2</span></em><span style="font-size:12.0pt"> and </span><em><span style="font-size:12.0pt">bax</span></em><span style="font-size:12.0pt"> genes in kidney cancer cells was that among the </span><em><span style="font-size:12.0pt">Proteus</span></em> <em><span style="font-size:12.0pt">mirabilis</span></em><span style="font-size:12.0pt"> samples, 37 samples had the </span><em><span style="font-size:12.0pt">acrA</span></em><span style="font-size:12.0pt"> gene, 59 samples had the </span><em><span style="font-size:12.0pt">acrB</span></em><span style="font-size:12.0pt"> gene, and 58 samples had the Urea gene. The results of the MIC test showed inhibition of the growth of </span><em><span style="font-size:12.0pt">Proteus</span></em><span style="font-size:12.0pt"> strains at a concentration of 375 &mu;g/ml of the supernatant. The expression of the </span><em><span style="font-size:12.0pt">acrB</span></em><span style="font-size:12.0pt"> gene in the treated strains was significantly decreased compared to the control group. According to the analysis of MTT test data, the half-maximal inhibitory concentration (IC50) for this supernatant was calculated to be 202.8 &mu;g/ml after 72 hours.</span></span><br> <span style="font-size:11pt"><strong><span style="font-size:12.0pt">Conclusion</span></strong><span style="font-size:12.0pt">: </span><span style="font-size:12.0pt">The results showed a 52.86% decrease in </span><em><span style="font-size:12.0pt">bcl-2</span></em><span style="font-size:12.0pt"> gene expression and a 60.21% increase in </span><em><span style="font-size:12.0pt">bax</span></em><span style="font-size:12.0pt"> gene expression in treated cancer cells compared to the control group. Cytotoxicity studies of this study showed that it could suppress the proliferation of renal cell carcinoma (ACHN) cells with an IC50 of 202.8 &mu;g/ml.</span></span></p> پروتئوس میرابیلیس, آپوپتوز, لاکتوکوکوس لاکتیس, سرطان کلیه, پروبیوتیک Proteus mirabilis, Lactococcus lactis, apoptosis, kidney Neoplasms, probiotics 189 202 http://aums.abzums.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-1624-1&slc_lang=fa&sid=1 Hamed Azadifar حامد آزادی فر hamedazadifar.ha@gmail.com 100319475328460013672 0009-0001-2871-4553 No دانش‌ آموخته کارشناسی‌ ارشد، گروه میکروبیولوژی، دانشکده علوم پایه، دانشگاه آزاد اسلامی واحد ساوه، ساوه، ایران kumarss amini کیومرث امینی dr_kumarss_amini@yahoo.com 100319475328460013673 100319475328460013673 Yes Islamic Azad University, Saveh Branch دانشیار گروه میکروبیولوژی، دانشکده علوم پایه، دانشگاه آزاد اسلامی واحد ساوه، ساوه، ایران