Alborz University Medical Journal

fa بررسی پایداری بیان پروتئین غشای سطحی Lipl41به صورت فیوژن با پروتئین کوچک چاپرون Lepدر لپتوسپیرا The Evaluation of the Stability of Lipl41 Outer Membrane Protein Expression in Fusion with Lep, a Small Chaperone Protein, inLeptospira تخصصي Special پژوهشي Research زمینه و هدف: لپتوسپیروزیس یک بیماری باکتریایی مشترک بین انسان و دام با انتشار جهانی می‌باشد که توسط اسپیروکت بیماریزایی به نام لپتوسپیرا ایجاد می‌گردد. متاسفانه تشخیص این بیماری بدلیل علائم متعدد بالینی بسیار مشکل و دارای محدودیت است.  LipL41یکی از فراوانترین پروتئینهای غشای خارجی لپتوسپیرا ست که فقط در سویه های بیماریزا وجود دارد. ژن کوچکی بنام lepدر فاصله بسیار نزدیک با ژن  lipl41بر روی کروموزوم باکتری قرار دارد که کمک کننده بیان آن می‌باشد. در این مطالعه برای اولین بار بررسی بیان و تخلیص پروتئین فیوژن Lipl41-Lep بر روی سویه های بومی رایج لپتوسپیرای بیماریزا در  سیستم پروکاریوتی صورت گرفت.    مواد و روش ها: توالی ژنی بر مبنای الگوی سرووارهای ایران پس از جمع آوری کلیه اطلاعات موجود در سایتNCBI طراحی و ساخته شد. سپس با کلونینگ در وکتوربیانی pET32a+ درE.coliBL21(DE3) انتقال و توسط القاء کننده IPTG بیان انجام شد. پس از لیز سلولی با روش دناتوراسیون خالص سازی صورت گرفت. روش وسترن بلات برای تایید حضور پروتئین فیوژن نوترکیب استفاده گردید.   یافته‌ها :نتایج آنالیز PCR وجود باند واضح حدود2000جفت باز را روی ژل آگارز تأیید کرد. مقادیر زیادی از پروتئین فیوژن نوترکیب60 کیلودالتونی در دمای ˚C37‌‌، با غلظت mM1/0 از IPTG و زمان 4 ساعت پس از القا به صورت نامحلول تولید، استخراج و خالص سازی شد. نتیجه گیری:یافته‌ها نشانگر مقدار کافی از بیان و تخلیص این پروتئین نوترکیب بصورت فیوژن بود. بنابراین از آن می‌توان در آینده بعنوان کاندیدای مناسبی در جهت تستهای تشخیص سرولوژیک مانند الایزا و همچنین برای واکسن های نوترکیب بر علیه لپتوسپیروز استفاده شود.   Aim and objective:Leptospirosis is a zoonotic disease caused by pathogenic spirochete called Leptospira that has worldwide distribution. Unfortunately, due to the variety of clinical symptoms, its diagnosis has many limitations. LipL41 is among the most abundant outer membrane proteins in Leptospira and is exclusively found in pathogenic species. A small gene called lep is located very close to lipl41 gene on the bacterial chromosome, which facilitates its expression. In this study, the expression and purification of LipL41-Lep fusion protein among prevalent pathogenic isolates in Iran was performed in a prokaryotic system for the first time.  Methods:All collected Lipl41 and Lep protein sequences were analyzed from the NCBI database. Complete codon sequences of the pattern of the Iranian serovars were designed and synthesized then sub-cloned into a pET32a+ and transformed into Escherichia coli BL21(DE3) to expression by using IPTG inducer. Thefusion recombinant protein was purified by denaturation and confirmed by western blot. Results:The results of PCR analysis showed a clear band of ~ 2000 bp in Agarose gel. Optimal expression of fusion recombinant protein (60kDa) was achieved post-induction at 4 h at 37 °C in the presence of 0.1 mM IPTG. Then it was purified in the insoluble form. Conclusion:The results demonstrated that adequate amounts of this fusion recombinant protein were expressed andpurified to be used as a fusion antigen in serological testing, such as ELISA, or for the development of subunit vaccines against Leptospirosis in the future. لپتوسپیرای بیماریزا, پروتئین فیوژن نوترکیب Lipl41-lep‌‌, بیان, تخلیص Pathogenic Leptospira, LipL41-Lepfusion recombinant protein, Expression, Purification 491 500 http://aums.abzums.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-1-317&slc_lang=fa&sid=1 Narges Golab نرگس گلاب 10031947532846009085 10031947532846009085 No Department of Microbiology, Karaj Branch, Islamic Azad University, Karaj, Iran گروه میکروبیولوژی، واحد کرج، دانشگاه آزاد اسلامی، کرج، ایران Naser Harzandi ناصر هرزندی nasharzan@gmail.com 10031947532846009086 10031947532846009086 Yes Department of Microbiology, Karaj Branch, Islamic Azad University, Karaj, Iran گروه میکروبیولوژی، واحد کرج، دانشگاه آزاد اسلامی، کرج، ایران Pejvak Khaki پژواک خاکی 10031947532846009087 10031947532846009087 No Department of Microbiology, Razi Vaccine and Serum Research Institute, Agricultural Research, Education andExtension Organization (AREEO), Karaj, Iran بخش میکروب شناسی، موسسه تحقیقات واکسن و سرم سازی رازی، سازمان تحقیقات، آموزش و ترویج کشاورزی، کرج، ایران Majid Tebianian مجید تبیانیان 10031947532846009088 10031947532846009088 No Department of Immunology, Razi Vaccine and Serum Research Institute, Agricultural Research, Education andExtension Organization (AREEO), Karaj, Iran بخش ایمنی شناسی، موسسه تحقیقات واکسن و سرم سازی رازی، سازمان تحقیقات، آموزش و ترویج کشاورزی، کرج، ایران Majid Esmaelizad مجید اسمعیلی زاد 10031947532846009089 10031947532846009089 No Department of Biotechnology, Razi Vaccine and Serum Research Institute, Agricultural Research, Education and Extension Organization (AREEO), Karaj, Iran بخش بیوتکنولوژی، موسسه تحقیقات واکسن و سرم سازی رازی، سازمان تحقیقات، آموزش و ترویج کشاورزی، کرج، ایران